一、植物激素的研究意义

        植物激素（Phytohormone）亦称植物天然激素或植物内源激素。是指植物体内产生的一些微量而能调节（促进、抑制）自身生理过程的有机化合物。已知植物体内产生的激素有六大类，即生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸、乙烯和油菜素甾醇；最近新确认的植物激素有多胺，水杨酸类，茉莉酸（酯）等等。
植物激素是植物感受外部环境变化，调节自身生长状态、抵御不良环境及维持生存必不可少少的信号分子，对于调节植物的各种生长发育过程和环境的应答具有十分重要的意义，并且不同植物激素直接存在一定的互助关系。

二、不同植物激素与研究方向的关系

        结合我司给客户代测的总结，我们总结出来以下几个研究方向与关联指标：
          ❶水杨酸、水杨酸甲酯、茉莉酸、茉莉酸甲酯：用于抗虫、抗病等生物胁迫。
          ❷水杨酸、脱落酸、乙烯前体（ACC）、赤霉素：用于抗旱、耐盐、抗寒冷等非生物胁迫
          ❸吲哚乙酸、脱落酸、细胞分裂素、赤霉素、油菜素内脂：用于植物生长发育，包含分化、成熟衰老、凋亡等
          ❹茉莉酸、赤霉素、脱落酸、生长素：用于种子萌发与休眠

三、植物激素检测一般有哪些检测方法呢

             目前植物激素测试方法有三类：酶联免疫法即ELISA法；高效液相色谱法（HPLC法）；液相与质谱联用方法（LC-MS/MS法）
           Elisa法是最为简便，检测周期短，检测单价更实惠，但是数据精度低于后两种方法，但是其优势在于适合大田试验筛选，样本数量很多，经费有限下，可以是实现快速、节约经费。但是目前高水平期刊对于测定激素采用ELISA法，认可度越来越低。并且ELISA法对于检测含量较高的激素比如IAA、ABA比较适合，其他含量低的激素检测就受到限制。
          HPLC法检测灵敏度高于ELISA方法，它适合的激素指标比较多，比如IAA,ABA、SA等，而对于GA、JA、BR等低含量的激素是不能精确检测出来或者检测不到。
          LC-MS/MS 该方法充分结合了液相的分离能力与MS的强定性能力，检测精确度可达Pg级别，定性与定量的精确度更好，数据精确度满足目前国内外期刊要求，适合对数据要求精确度高的客户，并且基本现有激素都能检测。

四、常见测试中的一些问题

          1、植物激素的游离态与结合态之说？
              有些植物激素并不是单一形态存在，常以两种状态存在与植物体内，一种是游离态，一种是结合态，两者在化学结构上区别在于是否有共价键结合的小分子，带小分子的为结合态，若无则为游离态。小分子结合不仅改变了激素的化学结构，并且在多数情况下导致激素活性下降，以至完全失活。所以对于有两种形态的激素，我们实际是测具有有生理活性状态--游离态激素。
实际测试过程中，客户指定测哪种激素，我们用该激素标准品来定性、定量。
         2、为什么所有激素指标不能一起测，要同类测或者一个个测？
            植物激素不同与糖、蛋白质含量高，在植株内激素含量极低的，因此要精确决定定量，前处理是至关重要的步骤之一，不同的激素指标前处理方法不同，特别是一些含量pg级别的激素，必须经过特殊的前处理，并排除基质效应的影响，才能得到准确的结果。
         3、植物激素为什么会出现检测结果或预期不符合或者相差很大，或者甚至相反？应该如何避免？
                1）、取样的关键性：植物激素在植物样本中含量极低，植物不同部位的细胞中激素本身变化很大，样本均一性难控制；所以尽量采集相同处理的相同部位；同时采集过程中，相当于对植物  进行了伤害胁迫，会引起植物应激反应；
             2）、存储条件的影响：植物激素处于不断的转移与代谢变化中，样本存储时间过久，反复冻融、运输干冰不够等，也会对结果产生影响。
       因此、建议大家要采集要取样时间一致，取样生理部位统一、取样后立即用液氮速冻，然后进行超低温保存。运输过程使用充足的干冰运输。

目的

为生化指标检测中土壤酶活及元素的采集、储存等操作提供参考。

适用范围

适用于土壤酶活及元素的采集及储存。

操作流程：

1.  样本收集

2. 野外大田或者实验室内，按照客户研究需要取一定量的鲜土，然后冷冻保存，若仅测酶活与土壤元素，可以先进行风干。

3. 风干样品：从野外采回的土壤样品要及时放在样品盘上，摊成薄薄的一层置于干净整洁的室内通风自然风干，严禁暴晒。

4. 取风干土壤若干质量，让后用木棍或塑料木棍碾压，并将植物残体、石块等侵入体和新生体剔除干净，细小已断的植物须根，可用静电吸附的方法清除。压碎的土壤全部通过2 mm孔径筛，然后过40目筛。

样本量要求

需过筛后土壤量≥5g/指标。

储存及运输

风干土壤常温运输，无需干冰。

鲜土样本可以用冰袋运输或干冰，

【注】：新鲜土壤需要风干、过筛。代测交期相应顺延！

目的

规范生化酶活及含量检测中细胞样本的采集、储存等操作规范。

适用范围

适用于生化酶活及含量检测中细胞样本的采集及储存。

操作流程

（1）材料准备

（2）细胞样本可分为贴壁细胞和悬浮细胞，两种类型细胞样本采集方法如下：

贴壁细胞：

取对数生长期细胞，去掉培养液，用适量预冷 PBS 清洗两遍，再加入少量PBS，用细胞铲刮下细胞，置于1.5 mL 离心管中，在1000 g，4℃离心 1 min，液氮淬灭。

悬浮细胞：

取对数生长期细胞液，在1000 g，4℃离心 1 min，去掉培养液，使用预冷PBS 清洗细胞两遍，置于1.5 mL离心管中，在1000g离心1 min，液氮淬灭。

（3）收集 收集的细胞即可用于细胞内代谢酶活及物质分析，上清液可用于细胞外代谢酶活及物质分析。

（4）储存 所有样本均做好标记，储存于液氮或-80℃冰箱中。

样本量要求细胞样本量≥10⁷ /指标

储存及运输

样本应储存于液氮或-80℃冰箱中。运输过程中应全程保持低温，建议使用干冰冷冻运输。

注意事项

（1）材料准备 冻存管、离心管、枪头等材料必须保持无菌，避免污染。

（2）快速原则 请务必提前设计准备好实验和材料，快速取样和预处理。

（3）低温原则 在采集、处理及运输过程中，请全程保持低温。

（4）一致性原则 在实验设计和取样的过程中，保持一致性。

a)设计一致性，不同样品除了需研究的内容不一致，其它都保持一致；

b)时间一致性，采样时间应控制在同一时间范围内；

c)预处理一致性，即所有样品的预处理方法、试剂等均保持一致。

（5）采集过程中需要对细胞进行计数，数量为≥10 ⁷ /指标，务必保持样本量的一致。

（6）操作过程中要保证细胞完整性，避免细胞内代谢物外漏。

（7）样本编号一定要清楚、牢固，防止在冷冻过程中编号丢失。