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直链淀粉含量酶法测定实验解析

发布时间:2020-04-20    访问量:

 

一、直链淀粉研究的意义
直链淀粉是以α-1,4 糖苷键连接而成的数千个单位长的、极少分支的葡萄糖链状分子,其分子结构对淀粉的糊化特性有很大影响。经济作物中的直链淀粉含量是影响作物感官品质和加工特性的一个重要因素,其含量在评价作物品质和农业选种、育种时具有实际意义。
二、直链淀粉含量测定方法
直链淀粉含量的测定,国内目前有国标GB/T 15683-2008 《大米 直链淀粉含量的测定》与农业部的NY/T2639-2014《稻米直链淀粉的测定 分光光度法》,还有有两个地方标。但是,国内权威测定标准的原理是一样的,采用碘比色法测定。
图片1.jpg
但是,支链淀粉-碘复合物在此过程中同样会形成,导致直链淀粉含量高估,需要进行校正。国外,采用伴刀豆球蛋白法,即根据伴刀豆球蛋白(Con A)能够与多个非还原性末端基团上的α-D-吡喃葡萄糖基或α-D- 吡喃甘露糖基单位特异性结合,再与淀粉中的支链淀粉成分特定的结合并生成沉淀,但是不能结合以线性为主的直链淀粉成分,最后通过测定反应产物,进而得到直链淀粉含量。如苏州格锐思生物研发的G0548W 支链-直链-总淀粉含量试剂盒(酶法)
 
三、测定的直链淀粉含量百分比的理解
在科研中经常会测直链淀粉含量、支链淀粉含量;或者测直链淀粉、总淀粉;也有三个指标同时测定。对于直链淀粉含量的概念也有两种不同的表达,一种是测直链淀粉占样本干重的百分比,一种是测直链淀粉占总淀粉含量的百分比。但是后者的研究更有意义,所以测直链淀粉含量占总淀粉含量百分比的居多。
四、国标与行标测试的关键点
国标测定中关键点之一:在于前处理脱脂,如果不进行脱脂处理,脂类物质会和碘争夺直链淀粉形成复合物,影响测试结果。关键点之二: 标准品的纯化与配比。国标法根据直、支链淀粉标准品不同的混合比例来计算样品中直链淀粉的含量。但当样品与标准品比例不相符合时,就会产生测量误差。
总之,此法操作繁杂,需要测试人员具备良好的实验技能和熟练的操作技巧。
农业部标准,省去脱脂过程,采用未脱脂参比样绘制标准曲线,使得检测结果得到补偿。但是参比样直链淀粉含量预先经过国标测定。
 
五、实验测定分析:(采用格锐思生物直链/支链/总淀粉含量(酶法)试剂盒 货号:G0548W)
 
1、实验材料:马铃薯淀粉、玉米淀粉、遗传改良粳稻遗传改良籼稻糯小麦(以上材料均由相关科研单位提供)
2、样本前处理:
酶法试剂盒测定直链淀粉关键之一,是样本的前处理,测这个指标与国标要求一样,样本处理很关键。
处理方法:打磨成粉状过筛。
如下图:
图片2.png 
3、根据格锐思生物公司试剂盒说明书完成实验。
4、实验结果:
 
样本名称
直链淀粉含量(%
市售糯米粉
1.7
遗传改良籼稻
13.2
遗传改良粳稻
11.7
糯小麦
1.7
小麦
20.4
玉米淀粉
21.4
马铃薯淀粉
25.1
65%直链淀粉标准品
64.5
 
    采用格锐思生物酶法试剂盒测的直链淀粉含量百分比均符合客户的预期!
 
参考文献:
[1]. GBT 15683-2008 大米 直链淀粉含量的测定
[2]. NYT2639-2014稻米直链淀粉的测定分光光度法
[3]. NYT 83-2017 米质测定方法
[4]. 稻米直链淀粉含量的简易测定方法。中国稻米

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