一、产品简介：

高铁还原酶（Ferric reductase，FCR）催化高铁螯合物中的Fe³⁺还原为Fe²⁺，在部分物种铁元素的吸收中有重要作用。

高铁还原酶（FCR）可以催化Fe³⁺还原为Fe²⁺，Fe²⁺再与亚铁嗪（ferrozine）生成紫红色化合物，该有色物质在562nm处有特征吸收峰，通过测定在562nm下的增加速率即可得出该酶活大小。

二、所需仪器和用品：

       酶标仪、96孔板、可调式移液器、水浴锅或恒温培养箱、低温离心机、蒸馏水。

三、测试波长：

      562nm

四、提供不同样本处理方式：

    ① 组织样本：

取约0.1g组织，加入1mL提取液，进行冰浴匀浆。4℃×12000rpm 离心5min，取上清，置冰上待测。

 ② 细菌/细胞样本：

先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；取约500万细菌或细胞加入1mL

提取液，超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；12000rpm 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

③ 液体样本：澄清的液体可直接检测；若浑浊则离心后取上清液检测。

五、标准曲线绘制：

      1、 标准品母液（15μmoL/mL）；把母液用蒸馏水稀释成以下浓度：0, 0.08, 0.16, 0.24, 0.32, 0.4μmoL/mL。

      也可根据实际来调整浓度。

2、 40μL标准品+10μL试剂三+150μL试剂四，混匀，室温静置5min后于562nm处读取吸光值A，依据结果即可制作标准曲线。 

六、结果计算：

按样本鲜重计算：

单位定义：每克组织每分钟催化生成1nmoL Fe²⁺定义为一个酶活单位（U）。

FCR (nmoL/min/g 鲜重)=[(ΔA+0.0325)÷0.0986]÷(W×V1÷V)÷T=8.5×(ΔA+0.0325)÷W

3、按样本蛋白浓度计算：

单位定义：每毫克组织蛋白每分钟催化生成1nmoL Fe²⁺定义为一个酶活单位（U）。

FCR (nmoL/min/mg prot)=[(ΔA+0.0325)÷0.0986]÷(V1×Cpr) ÷T=8.5×(ΔA+0.0325)÷Cpr

4、按照液体体积计算：

单位定义：每毫升液体每分钟催化生成1nmoL Fe²⁺定义为一个酶活单位（U）。

FCR (nmoL/min/mL)=[(ΔA+0.0325)÷0.0986]÷V1÷T=8.5×(ΔA+0.0325)÷Cpr

七、相关试剂盒

G0147F 高铁还原酶（FCR）活性测定试剂盒  可见分光光度法  48样 420

G0147W  高铁还原酶（FCR）活性测定试剂盒 微板法  96样  680  内送酶标板