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细胞样本采集操作指南发布于:2021-01-14 浏览:40 来源:


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目的

规范生化酶活及含量检测中细胞样本的采集、储存等操作规范。

适用范围

适用于生化酶活及含量检测中细胞样本的采集及储存。

操作流程

1)材料准备

材料

型号或级别

实验服、手套、口罩等防护设施

医用级

离心管、冻存管

建议使用无菌级管

移液器、枪头

无菌

记号笔

务必使用油性记号笔

细胞铲

无菌

液氮


离心机

4℃

冰箱

-80℃

2)细胞样本可分为贴壁细胞和悬浮细胞,两种类型细胞样本采集方法如下:

贴壁细胞

取对数生长期细胞去掉培养液用适量预冷 PBS 清洗两遍再加入少量PBS用细胞铲刮下细胞置于1.5 mL 离心管中1000 g4℃离心 1 min,液氮淬灭。

悬浮细胞:

取对数生长期细胞液1000 g4℃离心 1 min去掉培养液,使用预冷PBS 清洗细胞两遍,置于1.5 mL离心管中1000g离心1 min,液氮淬灭。

3)收集 收集的细胞即可用于细胞内代谢酶活及物质分析,上清液可用于细胞外代谢酶活及分析。

4)储存 所有样本均做好标记,储存于液氮或-80℃冰箱中。

样本量要求细胞样本量≥107 /指标

储存及运输

样本应储存于液氮或-80℃冰箱中。运输过程中应全程保持低温,建议使用干冰冷冻运输。

注意事项

1)材料准备 冻存管、离心管、枪头等材料必须保持无菌,避免污染。

2)快速原则 请务必提前设计准备好实验和材料,快速取样和预处理。

3)低温原则 在采集、处理及运输过程中,请全程保持低温。

4)一致性原则 在实验设计和取样的过程中,保持一致性。

a)设计一致性,不同样品除了需研究的内容不一致,其它都保持一致;

b)时间一致性,采样时间应控制在同一时间范围内;

c)预处理一致性,即所有样品的预处理方法、试剂等均保持一致。

5)采集过程中需要对细胞进行计数,数量为≥10 7 /指标,务必保持样本量的一致。

6)操作过程中要保证细胞完整性,避免细胞内代谢物外漏。

7)样本编号一定要清楚、牢固,防止在冷冻过程中编号丢失。