目的

规范生化酶活及含量检测中细胞样本的采集、储存等操作规范。

适用范围

适用于生化酶活及含量检测中细胞样本的采集及储存。

操作流程

（1）材料准备

（2）细胞样本可分为贴壁细胞和悬浮细胞，两种类型细胞样本采集方法如下：

贴壁细胞：

取对数生长期细胞，去掉培养液，用适量预冷 PBS 清洗两遍，再加入少量PBS，用细胞铲刮下细胞，置于1.5 mL 离心管中，在1000 g，4℃离心 1 min，液氮淬灭。

悬浮细胞：

取对数生长期细胞液，在1000 g，4℃离心 1 min，去掉培养液，使用预冷PBS 清洗细胞两遍，置于1.5 mL离心管中，在1000g离心1 min，液氮淬灭。

（3）收集 收集的细胞即可用于细胞内代谢酶活及物质分析，上清液可用于细胞外代谢酶活及物质分析。

（4）储存 所有样本均做好标记，储存于液氮或-80℃冰箱中。

样本量要求细胞样本量≥10⁷ /指标

储存及运输

样本应储存于液氮或-80℃冰箱中。运输过程中应全程保持低温，建议使用干冰冷冻运输。

注意事项

（1）材料准备 冻存管、离心管、枪头等材料必须保持无菌，避免污染。

（2）快速原则 请务必提前设计准备好实验和材料，快速取样和预处理。

（3）低温原则 在采集、处理及运输过程中，请全程保持低温。

（4）一致性原则 在实验设计和取样的过程中，保持一致性。

a)设计一致性，不同样品除了需研究的内容不一致，其它都保持一致；

b)时间一致性，采样时间应控制在同一时间范围内；

c)预处理一致性，即所有样品的预处理方法、试剂等均保持一致。

（5）采集过程中需要对细胞进行计数，数量为≥10 ⁷ /指标，务必保持样本量的一致。

（6）操作过程中要保证细胞完整性，避免细胞内代谢物外漏。

（7）样本编号一定要清楚、牢固，防止在冷冻过程中编号丢失。