1、试剂盒的运输

          生化试剂盒一般采用冰袋运输；运输中冰袋已融化并不会影响其质量，请放心使用。

2、试剂盒的保存

          收到后，请在预实验前及时确认各组分量是否与说明书标注的一致，若有疑问请及时与我们技术联系（联系方式见说明书右下方），拆开包装  后，请按照每个试剂的保存温度保存。

3、试剂盒有效期

   试剂盒大标签上显示试剂盒有效期，一般是3个月或6个月（具体以大标签为准）。粉体试剂加溶液后的保存周期，可参照说明书中“备注”一栏的说明（也可联系说明书下方的技术支持咨询确认）。   

4、预实验五步法

     强烈建议客户选取2-3个预期结果差别较大的样本做预测定。

   目的：了解本批样品情况，熟悉实验流程，避免实验样本和试剂浪费！

第一步：将试剂盒内的纸质版说明书通读一遍，核查试剂数量、状态（粉体、液体）及各组份的量与说明书是否一致，若无异常则按照规定温度存放。

                 第二步：临用前取出试剂，溶解或者恢复至室温，以待使用。

                 第三步：选择差异大的2-3个样本进行研磨提取，取上清液备用。

                 第四步：根据说明书操作步骤进行预实验。

                第五步：待预实验确定好样本检测浓度、调整情况后，再批量进行正式实验。

5、分光法（F）与微板法（W）的区别

            F:指分光法；W：指微板法;

         分光法是指使用紫外可见分光光度计或可见分光光度计检测，分光法试剂盒(货号中带“F”)，需要使用石英或玻璃比色皿；其规格是：光径：1cm,容积：1mL, 狭缝宽：3mm

        微板法指使用全波段连续酶标仪检测。微板法试剂盒（货号中带“W”），需要使用96孔酶标板或UV板，其规格是：U型底或平底、最大孔容量  300μL

6、普通酶标板与UV板的区别？

     使用酶标仪检测时，如果波长大于等于340nm,使用普通的96孔板；但是波长小于340nm时，需要使用UV板（紫外酶标板）；UV板（PS聚苯乙稀石英底）价格比较贵，但是可以清洗，重复使用。一般建议重复使用3-5次；

7、分光法与微板法试剂盒能混用吗？

      不可以。两者原理几乎一样，但因反应体系、样本用量、试剂浓度、仪器和耗材都不同，并且混用后结果的准确性不能保证，不建议混用与任意改变体系。

8、市面上见到的50T/48S；100T/96S;120T/100S是什么意思？

     T:指测试（Test）次数；在实验室中，这通常指的是反应孔；每个反应孔可以是一个实验样本，或者对照；并不代表测的样本个数。50T是50个反应孔，不一定代表测50个样本；   

    S：指可以测试的样本（Sample）个数；48样、96样：指可以检测48个样本、96个样本（不含重复）即得到48个、96个数据结果

9、官网上试剂盒规格标注的“48样”、“96样”是什么意思呢？

    “48样”、“96样”是试剂盒规格，我们定义了试剂盒可以测多少样，对于试剂盒需要的试剂量都给足的；一般会给到超出需用量的10-20%

    48样、96样：指可以检测48个样本、96个样本（不含重复）即得到48个、96个最终的数据结果。格锐思生物的试剂盒48样可以测不少于50个样本；96样指可以测定不少于100个样本。

10、标准曲线是否需要重新做？

      一般不建议重新做标准曲线，标准曲线绘制会损耗试剂量，不够测到试剂盒规格的样本数量，另外我们的标准曲线是可以溯源，保证标曲的客观、真实、科学严谨，可以直接使用。

    a、格锐思针对需要标曲曲线的指标，给了标准曲线方程，同时给了标准曲线图，以证实我们的标曲是客观做出来的，不是理论推导的。

        b、格锐思同时给了标准曲线绘制的实验的步骤，客户对标曲有疑问的话，可以按照我们步骤，重新做标曲。

        c、格锐思根据标曲推导出最终的计算公式，客户只需要测出吸光值差值与样本重量就可以带入计算。

11、什么是冰浴匀浆？

   （1）使用研钵匀浆：将研钵置于冰盒上匀浆即冰浴匀浆。称取样本置于研钵中，研钵和提取液提前预冷或将研钵置于碎冰、冰盒上，加入一半量的提取液研磨均匀，转移至离心管中，再向研钵中加入另一半量的提取液涮洗研钵，转移至同一离心管中合并；

（2）使用匀浆机进行匀浆：先把研磨模块提前放到-20℃预冷；然后将称好的组织放入离心管中，加入适量预冷的提取液、钢珠，按照匀浆机要求设定参数，进行研磨，动物植物组织都可以，对于纤维含量高，难磨样本可以提高赫兹和延长时间。或者多次反复研磨

 （3）使用液氮研磨后匀浆：样本液氮研磨成粉后，加入提取液再次按照（1）、（2）的方式研磨，或者放入超声波清洗仪300W超声5min，超声全程温度不得超过10℃。

12、样本的保存

      测常规指标，样本保存在-80℃下，一年以上都可以测；保存在-40℃下，半年之内都可以测；保存在-20℃下，三个月都没问题。

纤维素酶是能将纤维素水解的酶的统称，是一类复杂的多酶体系，根据其催化反应的功能不同可分为：内切葡聚糖酶(EC3. 2. 1. 4)、外切葡聚糖酶 (EC3. 2. 1. 91 )又称纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase，CBH)[1]和 β-葡萄糖苷酶(EC3. 2. 1. 21)又称（纤维二糖酶）[2]。它们协同作用于纤维素使其彻底降解为葡萄糖。

内切葡聚糖酶主要作用于纤维素的非结晶区，将纤维素长链降解为小分子纤维素或寡糖链；

外切葡聚糖酶又称作纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase，CBH)，与内切葡聚糖酶协同作用并负责降解纤维素的结晶区，将纤维素链剥离并水解β-1，4-糖苷键释放纤维二糖

β-葡萄糖苷酶不直接作用于纤维素，主要是将内切葡聚糖酶和外切葡聚糖酶作用产生的寡糖链和纤维二糖水解为葡萄糖。

简单概括：

纤维素酶≈内切葡聚糖酶(EC3. 2. 1. 4)+外切葡聚糖酶 (EC3. 2. 1. 91 )+β-葡萄糖苷酶(EC3. 2. 1. 21)。

内切葡聚糖酶(EC3. 2. 1. 4)目前常被称为纤维素酶，外切葡聚糖酶 (EC3. 2. 1. 91 )又称为纤维二糖水解酶(cellobiohydrolase，CBH)；

β-葡萄糖苷酶(EC3. 2. 1. 21)又称为纤维二糖酶。

参考文献：

[1] 纤维二糖水解酶的研究进展，FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES 2017 Vol. 43 No. 10

[2] 黑曲霉液体深层发酵产纤维二糖酶的研究, China Brewing  2012 Vol.31 No．4

一、植物激素的研究意义

        植物激素（Phytohormone）亦称植物天然激素或植物内源激素。是指植物体内产生的一些微量而能调节（促进、抑制）自身生理过程的有机化合物。已知植物体内产生的激素有六大类，即生长素、赤霉素、细胞分裂素、脱落酸、乙烯和油菜素甾醇；最近新确认的植物激素有多胺，水杨酸类，茉莉酸（酯）等等。
植物激素是植物感受外部环境变化，调节自身生长状态、抵御不良环境及维持生存必不可少少的信号分子，对于调节植物的各种生长发育过程和环境的应答具有十分重要的意义，并且不同植物激素直接存在一定的互助关系。

二、不同植物激素与研究方向的关系

        结合我司给客户代测的总结，我们总结出来以下几个研究方向与关联指标：
          ❶水杨酸、水杨酸甲酯、茉莉酸、茉莉酸甲酯：用于抗虫、抗病等生物胁迫。
          ❷水杨酸、脱落酸、乙烯前体（ACC）、赤霉素：用于抗旱、耐盐、抗寒冷等非生物胁迫
          ❸吲哚乙酸、脱落酸、细胞分裂素、赤霉素、油菜素内脂：用于植物生长发育，包含分化、成熟衰老、凋亡等
          ❹茉莉酸、赤霉素、脱落酸、生长素：用于种子萌发与休眠

三、植物激素检测一般有哪些检测方法呢

             目前植物激素测试方法有三类：酶联免疫法即ELISA法；高效液相色谱法（HPLC法）；液相与质谱联用方法（LC-MS/MS法）
           Elisa法是最为简便，检测周期短，检测单价更实惠，但是数据精度低于后两种方法，但是其优势在于适合大田试验筛选，样本数量很多，经费有限下，可以是实现快速、节约经费。但是目前高水平期刊对于测定激素采用ELISA法，认可度越来越低。并且ELISA法对于检测含量较高的激素比如IAA、ABA比较适合，其他含量低的激素检测就受到限制。
          HPLC法检测灵敏度高于ELISA方法，它适合的激素指标比较多，比如IAA,ABA、SA等，而对于GA、JA、BR等低含量的激素是不能精确检测出来或者检测不到。
          LC-MS/MS 该方法充分结合了液相的分离能力与MS的强定性能力，检测精确度可达Pg级别，定性与定量的精确度更好，数据精确度满足目前国内外期刊要求，适合对数据要求精确度高的客户，并且基本现有激素都能检测。

四、常见测试中的一些问题

          1、植物激素的游离态与结合态之说？
              有些植物激素并不是单一形态存在，常以两种状态存在与植物体内，一种是游离态，一种是结合态，两者在化学结构上区别在于是否有共价键结合的小分子，带小分子的为结合态，若无则为游离态。小分子结合不仅改变了激素的化学结构，并且在多数情况下导致激素活性下降，以至完全失活。所以对于有两种形态的激素，我们实际是测具有有生理活性状态--游离态激素。
实际测试过程中，客户指定测哪种激素，我们用该激素标准品来定性、定量。
         2、为什么所有激素指标不能一起测，要同类测或者一个个测？
            植物激素不同与糖、蛋白质含量高，在植株内激素含量极低的，因此要精确决定定量，前处理是至关重要的步骤之一，不同的激素指标前处理方法不同，特别是一些含量pg级别的激素，必须经过特殊的前处理，并排除基质效应的影响，才能得到准确的结果。
         3、植物激素为什么会出现检测结果或预期不符合或者相差很大，或者甚至相反？应该如何避免？
                1）、取样的关键性：植物激素在植物样本中含量极低，植物不同部位的细胞中激素本身变化很大，样本均一性难控制；所以尽量采集相同处理的相同部位；同时采集过程中，相当于对植物  进行了伤害胁迫，会引起植物应激反应；
             2）、存储条件的影响：植物激素处于不断的转移与代谢变化中，样本存储时间过久，反复冻融、运输干冰不够等，也会对结果产生影响。
       因此、建议大家要采集要取样时间一致，取样生理部位统一、取样后立即用液氮速冻，然后进行超低温保存。运输过程使用充足的干冰运输。

植物抗性（plant resistance）是指植物适应逆境的能力。植物周围的环境（气候、土壤、水分营养供应等因素）是经常变化的，往往构成干旱、过湿、淹水、盐碱、高温、低温、霜冻，大气、水和土壤污染等伤害，这些不利条件统称逆境或环境胁迫。

       植物抗性可分为三种形式，即避性、御性和耐性；研究抗性相关指标的各种生理指标的意义是什么呢？

      我们对常测抗性指标意义做了归纳：

       超氧化物歧化酶（SOD）（EC 1.15.1.1）在动植物、微生物和培养细胞体内广泛存在，其具有抗衰老、提高机体对多种疾病的抵抗力，能增强机体对外界环境的适应力，是生物体内一种重要的抗氧化酶。

      过氧化物酶（POD，EC 1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是普遍存在的一种重要的氧化还原酶，其活性高低与抗性密切相关

     过氧化氢酶(CAT，EC 1.11.1.6)普遍存在于植物动物组织中，其活性与生物体的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系。

     丙二醛（MDA）是由于生物体官衰老或在逆境条件下受伤害，其组织或器官膜脂质发生过氧化反应而产生的。它的含量与生物体衰老及逆境伤害有密切关系。

      游离脯氨酸（PRO）含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低凝固点，有防止细胞脱水的作用。在低温条件下，植物组织中脯氨酸含量增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

      可溶性蛋白：指可以以小分子状态溶于水或其他溶剂的蛋白。通常在植物生理，微生物、食品加工等实验中作为重要指标。如可溶性蛋白是植物抗寒性的重要指标之一。可溶性蛋白是重要的渗透调节物质和营养物质，他们的增加和积累能提高细胞的保水能力，对细胞的生命物质及生物膜起到保护作用，因此经常用作筛选抗性的指标之一。

      可溶性糖：是植物内一种重要的渗透调节物质，水分胁迫、颜胁迫，冷胁迫等不良环境都会使植物内的可溶性糖含量发生显著变化。

经常有客户咨询土壤铵态氮与硝态氮测定时，对土壤有什么要求呢？ 

      一般我们建议客户两个指标都采取鲜样测，如果选择风干土、鲜土、烘干土会有什么影响呢？下面我们看些数据：

结论与建议：

1、土壤NH4-N含量有显著影响，且风干土和烘干土含量明显高于新鲜土。因此建议研究土壤铵态氮时最好采用新鲜土；

2、风干土对土壤NO3-N含量没有显著影响，但是烘干土中土壤硝态氮含量显著下降；因此建议土壤硝态氮可以采用风干与新鲜土。

目的

为生化指标检测中土壤酶活及元素的采集、储存等操作提供参考。

适用范围

适用于土壤酶活及元素的采集及储存。

操作流程：

1.  样本收集

2. 野外大田或者实验室内，按照客户研究需要取一定量的鲜土，然后冷冻保存，若仅测酶活与土壤元素，可以先进行风干。

3. 风干样品：从野外采回的土壤样品要及时放在样品盘上，摊成薄薄的一层置于干净整洁的室内通风自然风干，严禁暴晒。

4. 取风干土壤若干质量，让后用木棍或塑料木棍碾压，并将植物残体、石块等侵入体和新生体剔除干净，细小已断的植物须根，可用静电吸附的方法清除。压碎的土壤全部通过2 mm孔径筛，然后过40目筛。

样本量要求

需过筛后土壤量≥5g/指标。

储存及运输

风干土壤常温运输，无需干冰。

鲜土样本可以用冰袋运输或干冰，

【注】：新鲜土壤需要风干、过筛。代测交期相应顺延！

目的

规范生化酶活及含量检测中细胞样本的采集、储存等操作规范。

适用范围

适用于生化酶活及含量检测中细胞样本的采集及储存。

操作流程

（1）材料准备

（2）细胞样本可分为贴壁细胞和悬浮细胞，两种类型细胞样本采集方法如下：

贴壁细胞：

取对数生长期细胞，去掉培养液，用适量预冷 PBS 清洗两遍，再加入少量PBS，用细胞铲刮下细胞，置于1.5 mL 离心管中，在1000 g，4℃离心 1 min，液氮淬灭。

悬浮细胞：

取对数生长期细胞液，在1000 g，4℃离心 1 min，去掉培养液，使用预冷PBS 清洗细胞两遍，置于1.5 mL离心管中，在1000g离心1 min，液氮淬灭。

（3）收集 收集的细胞即可用于细胞内代谢酶活及物质分析，上清液可用于细胞外代谢酶活及物质分析。

（4）储存 所有样本均做好标记，储存于液氮或-80℃冰箱中。

样本量要求细胞样本量≥10⁷ /指标

储存及运输

样本应储存于液氮或-80℃冰箱中。运输过程中应全程保持低温，建议使用干冰冷冻运输。

注意事项

（1）材料准备 冻存管、离心管、枪头等材料必须保持无菌，避免污染。

（2）快速原则 请务必提前设计准备好实验和材料，快速取样和预处理。

（3）低温原则 在采集、处理及运输过程中，请全程保持低温。

（4）一致性原则 在实验设计和取样的过程中，保持一致性。

a)设计一致性，不同样品除了需研究的内容不一致，其它都保持一致；

b)时间一致性，采样时间应控制在同一时间范围内；

c)预处理一致性，即所有样品的预处理方法、试剂等均保持一致。

（5）采集过程中需要对细胞进行计数，数量为≥10 ⁷ /指标，务必保持样本量的一致。

（6）操作过程中要保证细胞完整性，避免细胞内代谢物外漏。

（7）样本编号一定要清楚、牢固，防止在冷冻过程中编号丢失。

目的

为生化指标检测中植物组织样本的采集、储存等操作提供参考。

适用范围

适用于酶活及含量植物组织的采集及储存。

操作流程：

1.  材料准备

2.  采集 根据实验研究需要，切割下目标组织样本，用去离子水清洗组织表面，除去灰尘等异物，再用滤纸吸干表面液体；

3.  剪碎 在冰上将组织样本切割成5mm*5mm 左右的小块，根据组织样本类型适当调整；

4.  速冻 采用铝箔纸包括组织块，置于液氮中速冻约10s，根据组织块的大小做适当调整。

5.  分装 将速冻后的组织块分装至自封袋/锡箔纸/冻存管中，做好标记；

6.  储存 速冻后的组织转运储存于液氮或-80℃冰箱中。

样本量要求

组织样本需≥200 mg/指标。

储存及运输

样本应储存于液氮或-80℃冰箱中。运输过程中应全程保持低温，建议使用干冰冷冻运输。

注意事项

1.  材料 手术器械、容器等材料必须保持洁净，避免污染；

2.  代表性 取样需要具有代表性，且取样部位应一致；

3.  快速原则 请务必提前设计准备好实验和材料，快速取样和预处理；

4.  低温原则 在采集、处理及运输过程中，请全程保持低温；

5.  一致性原则 在实验设计和取样的过程中，保持一致性。a)设计一致性，不同样品除了

需研究的内容不一致，其它都保持一致，尤其是取样部位；b)时间一致性，采样时间应

控制在同一时间范围内；c)预处理一致性，即所有样品的预处理方法、试剂等均保持一

致；

6.  大块组织需要切成小块，方便储存和取样；

7.  避免反复冻融；

8. 样本编号一定要清楚、牢固，防止在冷冻过程中编号丢失。

目的

  为生化指标检测中动物组织样本的采集、储存等操作提供参考。

适用范围

  适用于酶活及含量动物组织的采集及储存。

操作流程：     

1.  材料准备

2.  采集 切割下目标组织样本，用生理盐水清洗残留血液，滤纸吸干表面液体；

3.  剪碎 在冰上将组织样本切割成 20~50 mg 左右的小块，根据组织样本类型适当调整；

4.  速冻 采用铝箔纸包括组织块，置于液氮中速冻约10s，根据组织块的大小做适当调整，在组织切除和处理30 min内进行速冻；

5.  分装 将速冻后的组织块分装至冻存管中，做好标记；

6.  储存 速冻后的组织转运储存于液氮或-80℃冰箱中。

样本量要求

组织样本需≥200 mg/指标。

储存及运输

样本应储存于液氮或-80℃冰箱中。运输过程中应全程保持低温，建议使用干冰冷冻运输。

注意事项

1.  材料 手术器械、容器等材料必须保持洁净，避免污染；

2.  代表性 取样需要具有代表性，且取样部位应一致；

3.  快速原则 由于代谢物在体内代谢速度快，请务必提前设计准备好实验和材料，快速取样和预处理；

4.  低温原则 在采集、处理及运输过程中，请全程保持低温；

5.  一致性原则 在实验设计和取样的过程中，保持一致性。

a)设计一致性，不同样品除了需研究的内容不一致，其它都保持一致，尤其是取样部位；

b)时间一致性，采样时间应控制在同一时间范围内；

c)预处理一致性，即所有样品的预处理方法、试剂等均保持一致；

6.  动物样本若需要使用麻醉剂，建议使用异氟醚；

7.  要避免血液污染，采用去离子水或等渗溶液漂洗干净；

8.  大块组织需要切成小块，方便储存和取样；

9.  避免反复冻融；

10. 样本编号一定要清楚、牢固，防止在冷冻过程中编号丢失。